A varíola dos macacos é transmitida aos seres humanos através de contato próximo com uma pessoa ou animal infectado, ou com material contaminado pelo vírus.
O vírus pode ser contraído se a pessoa for mordida por um animal infectado ou se tocar em seu sangue, fluidos corporais, manchas, bolhas ou cicatrizes. O vírus entra no corpo através da pele quebrada (feridas, arranhões), do trato respiratório ou das membranas mucosas (olhos, nariz ou boca).
De acordo com o CDC, o hospedeiro (principal portador de doenças) da varíola dos macacos ainda é desconhecido. No entanto, alguns roedores africanos, incluindo esquilos, são suspeitos de desempenhar um papel na transmissão.